植物ELISA试剂盒的实验原理和实验操作步骤(elisa定量检测试剂盒的原理)

admin 38 2022-06-23 17:14:00

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物羟基自由基水平。用纯化的植物羟基自由基抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入植物羟基自由基,再与HRP标记的羟基自由基抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅和样品中的植物羟基自由基呈正相关。

用酶标仪测定吸光度,通过标准曲线计算样品中植物羟基自由基浓度。

植物ELISA试剂盒的实验操作步骤如下:

1、标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照图表在小试管中进行稀释。

2、加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6、加酶:每孔加入酶标试剂,空白孔除外。

7、温育:操作同3。

8、洗涤:操作同5。

9、显色:每孔先加入显色剂,再加入显色剂B,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。

10、终止:每孔加终止液,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11、测定:以空白空调零,依序测量各孔的吸光度(OD值),测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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